Mesure d’impédance (technologie xCELLigence)
Imagerie cellulaire en temps réel (IncuCyte S3)
Mesure d’impédance (technologie xCELLigence)
La technologie xCELLigence (ACEA Biosciences, Inc.) assure un suivi dynamique du comportement cellulaire en temps réel et sans marquage. Une mesure d’impédance réalisée grâce aux appareils xCELLigence RTCA (Real-Time Cell Analyzer) permet de caractériser avec une grande précision les événements aussi bien précoces que tardifs de la réponse cellulaire.
Principe de la technologie xCELLigence
Alliance de la microélectronique et de la biologie cellulaire, cette technologie est basée sur une mesure d'impédance, les cellules poussant sur un support de microélectrodes d’or en modifiant le flux électronique. Une mesure d’impédance peut être réalisée fréquemment (30 secondes étant l’intervalle minimal entre deux mesures) permettant ainsi de caractériser la réponse cellulaire. Cette mesure d’impédance par un index cellulaire est représentatif de la densité cellulaire dans les puits, des caractéristiques morphologiques des cellules ainsi que de leur capacité d’adhésion et de prolifération.
Site Baclesse
Sur le site Baclesse, la plate-forme ImpedanCELL est hébergée dans une pièce dédiée d’environ 30 m2 mise à disposition par le laboratoire BioTICLA. Elle est équipée de deux postes de sécurité microbiologique (PSM), quatre étuves à CO2 (deux de 170 litres et une de 49 litres dédiées aux systèmes MP et DP, respectivement et une de 230 litres pour l’IncuCyte S3) et tout le petit matériel nécessaire (pipettes manuelles et automatiques, vortex, centrifugeuses...).
Système xCELLigence RTCA MP
La plate-forme est équipée de deux systèmes RTCA MP (Multiple Plates) capables d’accueillir 6 plaques de 96 puits chacun permettant l’analyse haut-débit de 1200 conditions simultanément avec une mesure possible toutes les 30 secondes sur plusieurs jours. Le système MP permet d’obtenir diverses informations sur l’état biologique cellulaire (adhésion, prolifération, viabilité, morphologie).
Chaque système RTCA MP est composé de 4 éléments :
Les cellules ensemencées dans la chambre supérieure de l'appareil migrent à travers une membrane formée de pores (principe de la chambre Boyden) et le signal d’impédance est mesuré sur la partie inférieure de la chambre.
Elle dispose également d’un système RTCA DP (Cell Invasion & Migration) capable d’accueillir 3 plaques de 16 puits. Ce système permet essentiellement d’étudier la migration et l'invasion des cellules mais également l’adhésion, la prolifération ainsi que la toxicité comme le système MP mais avec un moindre débit.
Le système RTCA Dual Plate (DP) est composé de 3 éléments :
Un microscope automatisé Cellavista® (SYNENTEC GmbH), thermostaté (27°C) dédié à l’utilisation de microplaques et adapté aux expériences à haut débit, permet de prendre une photographie numérique de tout ou partie des 96 puits en moins de 4 minutes à l’objectif x10. Il dispose de cinq objectifs (x2, x4, x10, x20 et x40) et de cinq filtres optiques permettant de travailler en fluorescence : 395 nm (DAPI), 470 nm (FITC/GFP), 505 nm (YFP), 530 nm (Cy3), 590 nm (Texas Red) et 620 nm (Cy5). Ce microscope est relié à un ordinateur fixe ultra-performant pour permettre un traitement optimal des images.
Les appareils précités ont été acquis grâce au soutien
du Centre de Lutte contre le Cancer François Baclesse
et aux fonds européens FEDER.
Site LABÉO
La plateforme de recherche en santé équine (Hippolia) est équipée d’un troisième système xCELLigence RTCA MP (Multiple Plates) localisé dans une pièce de niveau de confinement L2 pour réaliser les expériences de virologie et de bactériologie.
Il est capable d’accueillir 6 plaques de 96 puits permettant l’analyse haut-débit de 600 conditions simultanément avec une mesure possible toutes les 30 secondes sur plusieurs jours. Le système MP permet d’obtenir diverses informations sur l’état biologique cellulaire (adhésion, prolifération, viabilité, morphologie) et un suivi en temps réel des effets cytopathogènes de différents virus.
Chaque système MP est composé de 4 éléments :
Les appareils précités ont été acquis grâce au soutien de LABÉO du CPER CENTAURE (Contrat de plan Etat Région) et
aux fonds européens FEDER.
Imagerie cellulaire en temps réel (IncuCyte S3)
En 2017, la plate-forme ImpedanCELL s’est dotée de deux systèmes d’imagerie cellulaire en temps réel (IncuCyte S3, Sartorius) pour chacun des deux sites. Cet équipement automatise l’acquisition et l’analyse d’image en cinétique à long terme, directement depuis un incubateur, et permet l’étude de 6 plaques 96 puits (ou d’autres formats tels que les flacons de culture de 25 ou 75 cm2), de façon simultanée. Il est muni d’une tourelle optique automatisée avec 3 objectifs (x4, x10, x20) et autorise une visualisation en contraste de phase comme en fluorescence (vert : Ex- 440-480 nm, Em - 504-544 nm et rouge : Ex - 565-605 nm, Em - 625-705 nm) permettant ainsi de suivre plusieurs types d’expériences en parallèle. Ces deux systèmes ont été acquis afin d’augmenter pour chacun des deux sites la polyvalence et la capacité de réponse aux demandes d’investigations de l’activité cellulaire en temps réel à haut-débit. Cet équipement permet d’obtenir des informations sur la morphologie des cellules, la prolifération, la viabilité cellulaire, la migration et l’invasion, etc...et de façon plus spécifique d’étudier l’action de molécules sur des sphéroïdes, la capacité des cellules à réinvestir un espace blessé, la croissance des neurites, l’angiogenèse et de caractériser la mort cellulaire, etc.) en utilisant des modules dédiés et/ou des kits commerciaux spécifiques développés par le fournisseur (marquage des noyaux, caspase-3, annexine V, etc.) ou à façon après mise au point par la plate-forme.
Les appareils précités ont été acquis grâce au soutien du CPER (Contrat de plan Etat Région) Innovons (site CLCC F. Baclesse) et du CPER CENTAURE (site LABÉO).